产品目录

本试剂盒中的Hoechst染料紫外光激发波长350～370nm；发射波长465nm，在荧光显微镜下DNA发出蓝色荧光。

凋亡中晚期细胞形态学变化为染色质在局部区域凝集，固缩，继而核碎裂出现凋亡小体。在Hoeschst染色下，细胞核或者凋亡小体的DNA会呈现致密浓染或者碎块状致密浓染。

• 需可以观察蓝色荧光的荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
  
• 需PBS或0.9%NaCl溶液，盖玻片与载玻片。
  
• 荧光容易淬灭，应该尽量避光操作和保存。

• 贴壁细胞
  
  • 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9% NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%～80%满。
    
  • 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5mL固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
    本试剂盒使用固定液主要为4%多聚甲醛，如果不适合您的细胞或者效果不佳，很多种固定配方如细胞固定液(甲醇:冰乙酸＝3:1，现配)，都可以使用，可以根据自己细胞特点选用适合的固定方法。
    
  • 去固定液，用PBS或0.9% NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
    
  • 取5μL 100×染色浓缩液与0.5mL染色稀释缓冲液混合后加入染色5～10分钟，也宜用摇床，或手动晃动数次。
    
  • 用PBS或0.9% NaCl洗两遍，每次3分钟。
    
  • 滴一滴封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。使细胞接触封片液，切勿弄反。荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长在350nm左右，发射波长在460nm左右。
    封片液可使用50％PBS/50％甘油（等体积混合），如果荧光淬灭太快影响观察，应该选用商品化的抗荧光淬灭封片液。
• 悬浮细胞
  
  • 离心收集细胞样品于1.5mL离心管内，加入0.5mL固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
    
  • 离心去固定液，用PBS或0.9% NaCl洗两遍，每次3分钟。洗涤期间手动晃动。
    
  • 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50μL液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
    
  • 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
    
  • 取5μL 100×染色浓缩液与0.5mL染色稀释缓冲液混合后均匀滴上染色5～10分钟，用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。
    
  • 用PBS或0.9% NaCl洗两遍，每次3分钟。
    
  • 和贴壁细胞一样封片观察。
• 组织切片
  
  • 对于任何常见切片，处理至常规可以进行免疫染色时，或完成常规的免疫染色后，即可进行后续的Hoeschst染色。
    
  • PBS或0.9% NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。可在六孔板中操作。
    
  • 取5μL 100×染色浓缩液与0.5mL染色稀释缓冲液混合后加入染色5～10分钟，也宜用摇床，或手动晃动数次。
    
  • 用PBS或0.9% NaCl洗两遍，每次3分钟。
    
  • 和贴壁细胞一样封片观察。